植物原位雜交服務信息推薦,邁斯普

武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)學技術(shù)服務、技術(shù)咨詢及產(chǎn)品開發(fā)的生物技術(shù)服務企業(yè)。公司坐落于武漢光谷，由3位歸國博士領(lǐng)銜創(chuàng)辦。公司長期致力于建立并完善多項基礎(chǔ)生物技術(shù)服務平臺。現(xiàn)憑借自身技術(shù)特色，依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢，面向全國提供的生物技術(shù)服務。

在酵母雙雜交系統(tǒng)中，“誘餌”蛋白X至DNA-BD載體中，表達DNA-BD/X融合蛋白；這些改造后的基因在啟動子區(qū)有相同的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點，因此可以被相同的轉(zhuǎn)錄因子（如上述的Gal4蛋白）。待測試蛋白Y至AD載體中，表達AD/Y融合蛋白。一旦X與Y蛋白間有相互作用，則DNA-BD和AD也隨之被牽拉靠近，恢復行使功能，報告重組體中LacZ和HIS3基因的表達。

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應用：酵母雙雜交系統(tǒng)能在體內(nèi)測定蛋白質(zhì)的結(jié)合作用，具有高度敏感性。主要是由于：①采用高拷貝和強啟動子的表達載體使雜合蛋白過量表達。②信號測定是在自然平衡濃度條件下進行， 而如共沉淀等物理方法為達到此條件需進行多次洗滌，降低了信號強度。③雜交蛋白間穩(wěn)定度可被結(jié)構(gòu)域和結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄起始復合物而增強，后者又與啟動子DNA結(jié)合， 此三元復合體使其中各組分的結(jié)合趨于穩(wěn)定。④通過mRNA產(chǎn)生多種穩(wěn)定的酶使信號放大。同時， 酵母表型， X-Gal及HIS3蛋白表達等檢測方法均很敏感。酵母雙雜交就是基因轉(zhuǎn)錄所需的轉(zhuǎn)錄因子的兩個結(jié)構(gòu)域在兩個互作蛋白的吸引下位置靠近，誘導了基因的表達。

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內(nèi)源性酶滅活：如果探針的檢測是通過酶促法進行的，則樣品內(nèi)相應的內(nèi)源性酶必須被滅活。如內(nèi)源性的POD可通過含1% H2O2的甲醛溶液處理30min。

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網(wǎng)上有很多關(guān)于FISH的實驗步驟教程，但每個探針盒子的操作可能存在差異。懂了原理，才能以不變應萬變。

FISH的大致步驟分為探針變性、標本變性、雜交、洗脫、雜交信號放大(適用于適用生物素標記的探針)、復染、封片、熒光顯微鏡觀察FISH結(jié)果。