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PCR實驗室的設(shè)計原則

使用實時熒光PCR儀，擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并；

采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。

PCR實驗室工作基本原則

1.進入各工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照單一方向進行

試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→ 擴增產(chǎn)物分析區(qū)。

2.各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品不得混用。

PCR實驗室注意事項——擴增產(chǎn)物分析區(qū)

核酸擴增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。

PCR實驗室的設(shè)計原則

使用實時熒光PCR儀，擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并；

采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。

PCR實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備

擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增產(chǎn)物的測定。本區(qū)主要設(shè)備加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。

PCR實驗室注意事項——擴增產(chǎn)物分析區(qū)

本區(qū)是主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴增產(chǎn)物時，必須使用洗板，廢液必須收集至1 mol/L HCl中，并且不能在實驗室內(nèi)傾倒，而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實驗室的地方棄掉。

實驗室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。

PCR實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備

試劑準(zhǔn)備區(qū)：主要進行試劑的制備、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。

工作結(jié)束后，必須立即對工作區(qū)進行清潔。工作區(qū)的實驗臺表面應(yīng)當(dāng)可耐受諸如化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實驗臺表面的紫外照射應(yīng)當(dāng)方便有效。

擴增區(qū)：主要進行DNA擴增。此外，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)主要設(shè)備有：擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。

用過的吸頭也必須放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理，如焚燒。由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，故應(yīng)當(dāng)注意實驗人員的安全防護。

PCR實驗室裝飾

實驗室圍護結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固、氣密性好；所有陰陽角宜采用圓弧過渡；墻體內(nèi)壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪，材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。