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間接法1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；2.次日洗滌3次；3.加一定稀釋的待檢樣品（未知）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；4.（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二（抗）0.1ml；5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；6.’后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。



檢測及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗(yàn)操作者準(zhǔn)確地做稀釋工作，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性。白介素6是一種,已被證實(shí)為B細(xì)胞分化因子.它是一種形成系統(tǒng),它的生理特性,如肝細(xì)胞急性蛋白合成的誘導(dǎo)和基于和白介素3協(xié)同作用的生激等,也備受關(guān)注.并且已證實(shí)白介素-6與病理學(xué)存在穩(wěn)定的相關(guān)關(guān)系.例如,報(bào)道多種疾病的生長因子為白介素-6, 瘤細(xì)胞能合成白介素-6并表達(dá)白介素-6受體。

操作步驟1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。