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發布時間:2021-09-29 05:49  
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等溫核酸試劑盒
據介紹,RPA檢測的靈敏度很高,能夠將痕量的核酸(尤其是DNA)模板擴增到可以檢出的水平,從單個模板分子得到大約1012擴增產物。而且RPA還用不著復雜的樣品處理,適用于無法提取核酸的實地檢測。RPA不僅可以對擴增產物進行終點檢測,還可以對擴增過程進行實時監控,甚至可以通過試紙條(側流層析試紙條LFD)讀取結果。
目前,TwistAmp? 試劑盒的擴增子長度在500bp以內。不過,經過特別優化的RPA擴增,也可以生成更長的擴增產物,或者減慢擴增速度(便于定量),甚至在更低的溫度下進行反應。
核酸試劑盒是如何工作的?
病毒的基因序列被設定為檢測靶點,通過對檢測樣本進行PCR擴增,因PCR反應模板僅為DNA,因此在進行PCR反應前,應將新型冠狀病毒核酸(RNA)逆轉錄為DNA,使靶點的DNA序列指數級增加,每一個擴增出來的DNA序列都可以于預先加入的熒光標記探針結合,產生熒光信號,擴增出來的靶點基因越多,累積的熒光信號就越強(就好比演唱會如果只有一個粉絲搖熒光棒很不顯眼,如果大家一起搖那就嗨了)。如果樣本中沒有該病毒,自然也就檢測不到熒光信號的增強了。
“一般來說,核酸檢測是目前準確的診斷方法。”有人告訴記者,核酸檢測試劑盒出現假陰性,即沒有發現隱藏的病毒,可能與兩個方面有關。一是樣品沒有采集到。這一點很容易理解。例如,咽拭子采樣時人比較難受,深度不夠可能會采集不到含有病毒的樣本。但這樣的情況應該很少發生。
另一個假陰性的原因是核酸檢測試劑盒的探針和引物質量有波動,特別是定量的不造成檢測的不準確。換句話說,由于這一次各家核酸檢測試劑盒供應商都是臨時啟動,有些準備不足,或是執行規定步驟不到位,導致在生產過程中不進行定位,或是酶活性不足,或是酶中含有抑制酶鏈反應的重金屬離子等,都可能造成檢測結果出現假陰性。
數字PCR法和熒光PCR法的關鍵區別在于檢測結果的定量和相對定量差異。據了解,現階段數字PCR試劑和機器相價格加高(一臺儀器近百萬元),在SARS-CoV-2快速檢測中的優勢并不大。
不過,由于具備自動化程度更好、耗時更短等技術優勢,國內多家掌握了數字PCR技術的核酸試劑研發企業正在嘗試開發適用于SARS-CoV-2檢測的相關試劑盒。