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(1) 根據試驗要求，制備枯草黑色變種芽孢懸液和芽孢樣片。

(2) 每次試驗取 2 個菌片為一組，實驗室井式爐廠家，平放于無菌平皿內，勿重疊。加蓋，分置于滅菌柜的各層，內、中、外不同部位。試驗時，滅菌柜內片樣本外，還應滿載以模擬的常規處理物品。

(3) 關閉柜門，開啟電源，按滅菌柜設計程序進行滅菌。滅菌完畢，取出平皿，將菌片取出接種于含 5.0ML 營養肉湯培養基試管中，置 37℃ 培養箱內作定性培養。72 H 后觀察結果。

肉湯管混濁者表示有菌生長， 判為陽性; 肉湯管澄清者表示無菌生長， 繼續培養至第 7 D， 若仍無菌生長，判為陰性。

對難以判定的肉湯管，取其中 0.2ML 懸液接種營養瓊脂平板，用滅菌 L 棒涂佈均勻，置 37℃ 培養箱中培養。48 H 后涂片染色，在顯微鏡下觀察菌落形態，或進一步做其他試驗，以判斷生長者是否為試驗菌。若有非試驗菌污染，應查找原因重新進行試驗。

(4) 測試中，應同時設立定性和定量陽性對照組(菌片對照)與陰性對照組(培養基對照)。

(5) 定量陽性對照組，以同批試驗用菌片放在室溫下，待試驗組滅菌接種后，立即將該菌片 2 片分別移入含 5.0ML PBS試管中，各振蕩 80次洗滌。進行活菌培養計數。

(6) 定性陽性對照組，以同批試驗用菌片放在室溫下，待試驗組滅菌接種后，立即將試驗菌片 2 片，分別接種于 5.0ML 營養肉湯培養基，放入培養箱中作定性培養，觀察有細菌生長情況。

(7) 陰性對照組，以空白樣片 2 片，分別接種于 5.0ML 營養肉湯培養基，同時將未接種過的營養肉湯培養基放入培養箱中作定性培養，觀察有無細菌生長。

(8) 試驗重復 5 次。

(9) 在 5 次試驗中，每次試驗中陽性對照菌片的回收菌量均應達5×`10^5` CFU/片～5×`10^6`CFU/片；定性陽性對照組，細菌生長良好；陰性對照應無菌生長。陽性或陰性對照若有不符合上述要求的結果，試驗作廢，重新進行。

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