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發布時間:2021-10-20 03:56  
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分子實驗介紹——熒光檢測
細胞熒光染色是以熒光物質標記而進行抗原定位的技術。在細胞中,通過特定的標記,可以檢測目的蛋白表達量和表達定位。是細胞中的可直觀觀察細胞內蛋白定位和表達的實驗方法。
實驗流程:細胞固定-細胞膜破膜-蛋白封閉-目的蛋白結合-熒光二抗結合-DAPI染色-熒光顯微鏡拍照或激光共聚焦顯微鏡拍照。
結果示例:
細胞熒光染
通過觀察細胞中蛋白的熒光強度和定位分析該蛋白的表達變化。
分子生物學服務
公司建有100平米分子實驗室,配備有PCR儀、定量PCR儀、電泳儀、恒溫培養箱、恒溫搖床、垂直電泳儀、蛋白轉印儀、蛋白發光成像儀等設備。除了文中提到了三個主流平臺,外顯子組捕獲方面的新產品也在不斷推出,研究人員的選擇也將更廣泛。分子組技術人員畢業于中國農業大學、華中科技大學同濟醫學院、浙江理工大學等高校生物醫學相關,全部具有碩士研究生以上學歷,熟練掌握分子生物學相關實驗,可開展多種分子生物學檢測服務。

分子實驗室部分設備
RNA pull down 檢測
RNA pull down:RNA沉淀檢測,是檢測RNA結合蛋白與其靶RNA之間相互作用的主要實驗方法之一。全轉錄組測序全轉錄組是指特定組織或細胞在特定狀態下所有轉錄產物的總和,包括mRNA和各種noncodingRNA。使用體外轉錄將RNA進行生物素標記,并與細胞蛋白裂解液孵育,形成RNA-蛋白復合物。復合物通過磁珠結合后分離,復合物純化洗脫后通過Western blot驗證檢測特性的蛋白。若篩選可能結合的蛋白通過質譜實驗進行檢測篩選。
二、操作步驟:
1. 所有在純化系統里使用的溶液當日都需要經過 0.22μm 的濾膜抽濾、脫氣處理;保存 4℃ 冰箱里的緩沖液若要在室溫使用需恢復至室溫后抽濾脫氣;
2. 樣品上柱純化前,需先濾膜過濾,少量樣品可用離心(13000rpm,10min);
3. 依次用水、緩沖液洗泵;設置流速和柱前警報壓(壓力值參閱層析柱及填料說明書,取較小的一個大耐受壓力)。防止柱中進入氣泡,影響分離效果;
4. 當柱子限壓在 0.3MPa,或者在限壓狀態下流速很低時,pH valve 中的 Restirtor 可以切換成 Off line,即顯示 By-pass 狀態;
5. 當需要通過儀器上樣環上樣時,將 W1 閥口處換成帶透明短軟管的閥門,從此處閥門位通過倒吸樣品上樣;
6. 進樣閥「Inject」為上樣狀態。上樣結束可將進樣閥切換回「Load」狀態。并用純水認真清洗上樣環至少 3 次;將 W1 閥口處換回原來接頭閥門。
7. 純化結束后,用純水清洗泵和平衡柱子;再用 20% 的乙醇清洗泵以及系統。長期不用,層析柱應保存在 20% 的乙醇中,泵放置在 20% 乙醇中;
8. 實驗結束后及時傾倒廢液瓶里的廢液;