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發布時間:2021-10-10 08:01  





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調整流量過快…防止壓力、溫度急劇變化和機械振動。氣溫驟降或使色譜柱從高處落下,都會影響柱內填充狀態;柱壓突然升高或降低,也會對柱內填充物產生沖力,所以在調節流速時要緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩(如前面所述)。反向色譜柱…一般情況下,色譜柱不能反沖,只有生產者指示柱可以反沖時,才能反沖去除留在柱頭的雜質。反之,反向將迅速降低柱效。預加保護柱為了避免破壞固定相,應選擇合適的流動相(特別是 pH)。有時候,一預柱可以在進樣器前連接,分析柱是硅膠粘合時,預柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱前先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質溶解。
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不要把復雜的樣品,特別是生物樣品直接注入到柱中,需要對樣品進行預處理,或者在進樣器與色譜柱之間連接一個保護柱。保護柱一般為填充具有相似固定相的短柱。可以也應該經常更換保護柱。【前輩經驗】如何排除小概率故障?【1】泵壓跳動,跳動范圍約10 bar。對策:原來的小白頭有點臟,換了以后還沒有解決;2、將主動閥上的閥芯取出,發現類似于氣泡的存在,在超聲5分鐘內浸入-水溶液中試著除去氣泡,重新安裝后觀察,仍未解決;更換新閥芯,安裝完畢后,再也沒有跳動,觀察一段時間后比較平穩,順利解決。
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常規除氣方法1.吹氦脫氣。使用氦氣在液體中溶解度低于空氣這一特性,在0.1 MPa壓力下,大約60 mL/min的流速通入流動相儲液容器10~15 min,就能有效地將溶解的空氣從流動相中排除,可有效排除80%的氧氣。利用一種的分布式噴射裝置,一體積中的氦氣可以從流動相中幾乎全部體積中排除。這就是說,1 L氦氣可以通過1 L流動相進行排氣。這樣的脫氣方法是好的,但是我國氦氣價格比較高,很少有實驗室采用這種方法。
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2.加熱回流法。該方法的脫氣效果較好。運行時要注意冷凝塔的冷卻效率,否則溶劑流失,混流相比例將發生變化。3.抽真空除氣。這種方法可以用真空泵,將溶解氣體降到0.05~0.07 MPa。但真空脫氣將改變混合溶劑的組成,從而影響實驗的重復性,故多用于單溶劑體系的分析。4.超聲波除氣。超聲波清洗機內用超聲波對欲脫氣進行振蕩10~20分鐘。該方法的脫氣效果差。5.聯機通風。現商品 HPLC儀表,可與線式脫氣機配套。聯機除氣簡單,故障少,效果好。推薦購買儀器時一定要購買,有些公司為選購件,所以與儀器公司談配置時要和公司確認。
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移動相中受熱,或流動相不同組分混合將產生氣體,氣泡進入泵內造成壓力波動,色譜圖上出現毛刺。可以試用以下方法來解決問題:流動相再脫氣;采用更有效的脫氣方法或兩者配合使用;改系統外混合前進行混合。HPLC使用的流動相必須預先除氣,邯鄲棕色螺口樣品瓶銀色鋁蓋,否則很容易在系統中漏氣,50ml棕色螺口樣品瓶銀色鋁蓋,影響泵的工作。在體系中產生氣泡:流動相本身存在,梯度淋洗混合后會放出氣泡;氣泡的影響:存在于管道中,系統壓力不穩定,實驗結果偏離;存在于單向閥中,容易導致液體回流,流量不準確,甚至不吸液存在于檢測器中,2mL棕色螺口樣品瓶銀色鋁蓋,對檢測器產生影響。因此對液相相對流動相的氣泡和雜質要求比較嚴格。汽泡對柱子的分離效率有影響,檢測器的靈敏度、基線穩定性甚至不能檢測。(噪音增加、基線不穩定、突然跳動)。
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另外,溶解在流動相中的氧也可以與樣品、流體相甚至固定相(如胺)反應。溶氣還會引起溶劑 pH值的變化,給分離和分析結果帶來誤差。溶氧能與某些溶劑(例如,、四氫)形成紫外吸收絡合物,這種配合物能夠改善背景吸收(尤其是低于260 nm),并導致探測靈敏度的輕微下降,但更重要的是,會造成基線漂移或形成鬼峰(假峰)。熒光檢測中,在一定條件下,溶解氧也會引起溶解氧,4mL棕色螺口樣品瓶銀色鋁蓋,尤其是芳香烴、脂肪醛、酮等。有時,熒光反應可降至95%以上。電化學檢測(尤其是還原電化學法)對氧的影響較大。去除流動相中的溶解氧,將大大提高紫外檢測器的性能,并提高某些熒光檢測應用中的靈敏度。常見的脫氣方法有:加熱煮沸、抽真空、超聲波、吹氦等。對于混合溶劑,采用抽氣或煮沸的方法,需考慮因溶劑揮發較低而引起的成分變化。

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