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備型柱子柱壓上升，柱效下降，怎么辦？

對高的價值的制備柱來講，延長柱子壽命是很重要的。一般要注意保護柱子，一般來說，制備柱子一般需要保護柱配套。

下面是可能堵塞柱子的原因：

（1）如果您所分離的樣品中雜質較多而您在上樣前沒有經過過濾（0.45微米），一些顆粒性雜質會積聚在柱頭造成柱壓升高。

（2）也有可能是因為您所使用的流動向中含有緩沖鹽的原因，結晶或發生化學變化而堵塞。可以把柱子沖一沖。

（3）流動相是否符合液相色譜的要求？是否過濾處理？

反相色譜分離純化后，怎樣除去流動相產品中的TFA和乙腈或其他雜質？

TFA是反相色譜分離中常用的添加劑。可以用凍干的辦法去除，國外許多文獻是這樣報道的。還可以試試離子交換、凝膠層析、甚至透析和超濾，其中，離子交換層析效果比較好，還可以起到濃縮樣品的作用。

首先，凍干的辦法應該可以幾乎完全地除去TFA和乙腈，藥品實驗前盡量先檢測一下凍干品中的殘留量，只要不超過允許范圍，這種辦法是很簡單、有效的。

其次，如果你的藥品的分裝量不大的話(<100ug)，建議你用離子交換層析，盡量裝一個小一點兒的柱子，讓含鹽洗脫峰的蛋白濃度達10mg/mL以上，稀釋后完全符合試驗要求。如果用分子篩，考慮稀釋，盡量也先過一個離子交換。此外可以試試疏水層析。如果產品是堿的話，可能會形成TFA鹽，這樣通過上述方法就無法除去。一般可以用堿水洗，然后將產品萃取出來。或者在里面加入一定量的鹽酸，再干燥后形成鹽酸鹽。

工業制備色譜

蛋白質的特點使得其分離過程與傳統化工分離過程有著極為不同的特點:(1)分離對象是具有特定的生物活性的生物大分子產品，分離過程設計中不恰當的物理和化學環境等(如溫度、PH值、緩沖液選擇、、攪拌和剪切力等)皆有可能引起其蛋白質分子結構發生改變，從而使之失活;(2)由于發酵液、細胞培養液或勻漿液中，我們所需要的目標產物往往存在于含有許多性質十分相似的雜質的稀溶液中，如何從這樣一種復雜的稀溶液中經濟有效地提取產物是生物分離技術面臨的重大課題;(3)從衛生和安全角度出發，對于用基因工程產品，有著極高的純度和同一性要求，對其中的有害雜質去除率要求極高，對分離設備材質和分離過程中引入的分離介質也有著嚴格的限制。