UPLC常用指南「納微科技」

無論是生物制藥大規(guī)模分離純化還是藥l物分析、食品檢測、環(huán)境監(jiān)測、石油化工產(chǎn)品質(zhì)量控制、生命科學(xué)研究等都離不開色譜技術(shù)。色譜填料是色譜系統(tǒng)的心臟，因此被譽為色譜“芯”。改革開發(fā)以來，中國色譜領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究取得突飛猛進的進步，發(fā)表文章數(shù)量位居世界第l一，但中國無論是用于工業(yè)分離純化還是實驗室分析檢測的色譜填料和色譜柱基本依賴進口，中國色譜產(chǎn)業(yè)長期處于缺“芯”狀況。而且?guī)缀跛兄卮笊V理論的創(chuàng)建，新的色譜分離分析模式的建立，新型色譜填料技術(shù)的發(fā)明，及關(guān)鍵產(chǎn)業(yè)化技術(shù)突破都與中國14億人口無關(guān)。這對于擁有l多色譜領(lǐng)域?qū)Ｂ氀芯咳藛T，色譜文章多年位居世界第l一的國家來說是比較尷尬的。納微科技將給大家講解納微科技是如何去破l解這一局面。

高l效液相色譜(HPLC) 是20 世紀 70 年代發(fā)展起來的可以對多組分復(fù)雜樣品進行高l效、快速的分離分析技術(shù)。伴隨著色譜理論體系不斷完善，色譜柱種類日益豐富，新型色譜填料不斷開發(fā)成功，新的分離模式和分離方法的建立，色譜儀器性能不斷改進和更新，液相色譜分析技術(shù)已成為藥l物分析、食品檢測、環(huán)境監(jiān)測、石油化工、生命科學(xué)等不可或缺的工具。色譜柱是液相色譜系統(tǒng)的心臟，色譜填料是色譜柱核心，因此色譜柱和色譜填料被譽為色譜“芯”。開發(fā)新型高l性能色譜填料以滿足越來越復(fù)雜樣品高l效、快速分離分析的需求一直是業(yè)界的追求目標。隨著生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、制藥、及合成化學(xué)的迅猛發(fā)展, 人們對HPLC 性能不斷提出更高、更新的要求。提高色譜填料的柱效、選擇性、峰容量和使用穩(wěn)定性, 增大填料的pH 使用范圍、延長填料使用壽命, 具有多種分離模式以及對環(huán)境友好已經(jīng)成為色譜填料的發(fā)展方向。

反相色譜是比較常用的色譜分離模式，占到了全部分析色譜的70%左右。通常只需優(yōu)化流動相組成就可實現(xiàn)對大多數(shù)有機化合物和多肽的分離分析。反相硅膠色譜填料的制備方法比較簡單，主要是通過硅膠表面羥基與帶不同烷l基鏈或試劑鍵合。其中C4、C8和C18 硅膠鍵合相是使用比較廣泛的反相色譜填料。反相色譜填料的研究是朝著柱效高、重現(xiàn)性好、分析速度快、制備方法簡單、硅羥基掩蔽完全、選擇性好、pH使用范圍寬、壽命長等目標進行。反相硅膠色譜填料發(fā)展主要是兩方面：一方面是制備越來越豐富的鍵合相以滿足HPLC 越來越廣的分離選擇性的要求；另外一方面是解決反相色譜填料表面殘留硅羥基帶來拖尾、pH適用范圍受限、及使用壽命短等問題。反相色譜填料制備的過程中, 由于位阻原因,硅膠表面的硅羥基不可能全部與試劑反應(yīng),殘留的硅羥基在反相分離過程中會與極性分子形成非特異性吸附，導(dǎo)致l極性化合物尤其是堿性化合物色譜峰變寬，甚至嚴重拖尾，柱效下降等。另外殘留硅羥基還會影響硅膠色譜填料的耐酸堿性，并限制其pH使用范圍,縮短填料使用壽命。因此開發(fā)有效封尾（封端）技術(shù)以減少或消除殘留硅羥基從而改善反相色譜填料性能是色譜填料研究的重要方向之一。另外在封端過程中引進帶正電荷的功能基團也可以屏蔽硅羥基對堿性化合物非特異吸附。