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發布時間：2021-10-24 01:07
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高壓液相色譜
這是指柱壓一般大于20bar（或300psi）的“高壓(或高效)液相色譜”，通常指所用色譜柱的塔板數大于2000，一般是在2000～20000的范圍之間。
當需要從大量的物質中分離純化不足1％的所需成分時，分離工作將會十分困難，往往在純化的后面階段需要使用10μm或更小顆粒的高效填料。為獲得所需微量組分，可采用如下分離手段：制備型分離→半制備型分離→分析型分離→產物。為提高每次分離獲得純品的數量，制備型高壓液相色譜分離通常在超載情況下運行。
高壓液相色譜，即目前常用的高效液相色譜。色譜柱內填裝的是粒度范圍較窄的微小顆粒固定相(3～30μm)，為使流動相流出，需采用較高的壓力，同時系統的復雜性及成本亦增大，但分辨率可得到較大的提高。而填裝較大顆粒的固定相時，如中壓液相色譜系統，裝柱較容易，柱的通透性較高(只需較低的泵壓力)，可采用更大的色譜柱和更經濟的儀器，由此分辨率也較低。
高效液相色譜儀流動相(MOBLLE PHASE)的問題
1、流動相的過濾。
配制好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因為溶液中含有很多肉眼難以發現的微小顆粒，如果不把它們濾除掉，就會堵塞泵口、柱頭上的過濾器，這樣就堵塞了流動相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。碰到這種情況時，要換用經過濾的流動相，并將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機清洗20分鐘，以除去濾片上的堵塞物。
2、流動相的脫氣。
流動相在使用前必須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動相中的氣體，否則，這些氣體會使柱填料的性能降低，還能夠對檢測器的信號產生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮氣脫氣等。真空脫氣法和氮氣流脫氣法是目前常用的脫氣法。水和甲醇混合后會產生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會進入色譜柱和檢測器，并將影響分析工作的正常進行。
高效液相色譜基本原理
液相色譜根據分離機理的不同可分為：
?液固吸附色譜
?液液分配色譜
?離子交換色譜
?離子對色譜法
?分子排阻色譜(或凝膠滲透色譜)
（一）液-固吸附色譜
流動相為液體，固定相為固體吸附劑，根據物質吸附作用的不同來分離物質。
（二）液-液分配色譜
流動相和固定相都是液體的色譜法即為液-液色譜，是利用樣品組分在兩種不相溶的液相間的分配來進行分離。一種液相為流動相，另一種是涂于載體上的固定相。
流動相極性小于固定相極性的液-液色譜法稱為正相分配色譜法。
流動相極性大于固定相極性的液-液色譜法稱為反相分配色譜法。
（三）離子交換色譜
（四）離子對色譜法
（五）分子排阻色譜法
